Teste MAC - Elisa para Dengue:

Qual a sensibilidade e especificidade diagnóstica do teste sorológico imunoenzimatico-MAC-ELISA coletado após o 6º dia do início dos sintomas?

Sorologia: os testes sorológicos complementam o isolamento do vírus ou, quando isso não é possível servem como um meio alternativo de diagnóstico. Existem várias técnicas que podem ser utilizadas no diagnóstico sorológico dos vírus do dengue, incluindo os de inibição de hemaglutinação (HI - Clarke & Casals, utilizando-se uma bateria com 6 flavivírus, 1 alphavírus e 1 bunyavírus), fixação de complemento (FC), neutralização (N) e ELISA de captura de IgM (Mac-ELISA, desenvolvido pelo CDC de Porto Rico). Os três primeiros exigem amostras pareadas de soro de casos suspeitos e a confirmação é demorada.

A Mac-ELISA é o exame mais útil e rápido para a vigilância, porque requer somente uma amostra de soro na maioria dos casos e o exame é simples e rápido. Baseia-se na detecção de anticorpos IgM específicos aos quatro subtipos do vírus do dengue. O anticorpo IgM anti-dengue se desenvolve rapidamente: após o quinto dia do início da doença. Na maioria dos casos, tanto nas - primo infecções quanto nas reinfecções, os anticorpos IgM são detectáveis.

MAC ELISA

O teste sorológico para dengue clássico inclui o MAC (-ELISA). Este ensaio utiliza dengue antígenos específicos de todos os quatro sorotipos (DEN 1-4) para a captura de anti-dengue IgM anticorpos específicos em amostras de soro. A maioria dos antígenos utilizados para este ensaio são derivados da proteína de envelope. Algumas das limitações do presente ensaio é a especificidade desses antígenos e reactividade cruzada entre outros flavivírus circulantes. Estas limitações devem ser contabilizados quando se trabalha em regiões onde a co-circulam vários flavivírus. Detecção de IgM não é útil para a determinação de sorotipo devido a reatividade cruzada do anticorpo se mesmo durante a infecção primária.

A resposta imune adquirida na sequência de uma infecção por dengue consiste na produção de anticorpos IgG e IgM dirigidos principalmente contra as proteínas do envelope do vírus. A resposta imune varia dependendo se o indivíduo tem uma dengue (primeira primária ou infecção de outros flavivírus) versus um secundário (tinha dengue ou outra infecção flavivirus no passado) infecção por dengue. Em geral, o diagnóstico da dengue depende do phasestage da infecção. O cronograma geral de uma infecção primária de isolamento do vírus ou de identificação, a detecção de IgM seguido por detecção de IgG é a seguinte:

A infecção por dengue primária é caracterizada por uma lenta e resposta de anticorpos de baixo título. Anticorpos IgM é o isotipo de imunoglobulinas primeiro a aparecer. IgG anti-dengue é detectável em baixo título no final da primeira semana da doença, e aumenta lentamente. Em contrapartida, durante uma infecção secundária, os títulos de anticorpos ascensão extremamente rápida e amplamente o anticorpo reage com muitos flavivírus. Altos níveis de IgG são detectáveis, mesmo na fase aguda e sobem drasticamente ao longo do processo de duas semanas. A cinética da resposta de IgM é mais variável. Níveis de IgM são significativamente mais baixos em infecções por dengue secundárias e, portanto alguns anti-dengue IgM reações falso-negativos são observados durante infecções secundárias. Segundo a Organização Pan-Americana da Saúde (OPAS) Orientações 80% dos casos de dengue foram detectados anticorpos IgM detectável por cinco dias de doença, e 93-99% dos casos IgM detectável por seis a dez dias de doença, que pode então permanecer detectável por mais 90 dias.

MAC-ELISA tornou-se uma importante ferramenta para o diagnóstico da dengue rotina, MAC-ELISA tem uma sensibilidade e especificidade de aproximadamente 90% e 98%, respectivamente, mas apenas quando utilizados cinco ou mais dias após o início da febre (ou seja, na fase de convalescença). Diferentes formatos, como ELISA de captura, captura ultramicroELISA, dot-ELISA, AuBioDOT captura de IgM e sondas têm sido desenvolvidos. Soros, sangue em papel filtro e saliva (mas não na urina) são úteis para detecção de IgM se as amostras são tomadas em fase de convalescença da doença (Vasquez et al., 2006). Uma variedade de diferentes kits comerciais está disponível com variável sensibilidade e especificidade. Diagnóstico da dengue se torna ainda mais difícil porque os anticorpos IgM dengue também reagem de forma cruzada, em certa medida com outros flavivírus, como o vírus da encefalite japonesa, LES, WNV e YFV.